鹽溶液直接在280nm下測UV為什么不穩(wěn)定?

問題描述： 表示紫外分光酣籂豐餃薟祭奉熄斧隴光度計在波長為280nm處的吸光度值，由于在280nm處，蛋白質有一個明顯的吸收峰，因此在此波長下蛋白質的濃度與吸光度值呈線性關系，可以定量表示蛋白質在溶液中的含量

回答(1). 紫外吸收檢測DNA濃度與純度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收檢測DNA濃度與純度的原理,掌握測定方法. 原理： 核酸的最大吸收波長為260nm,蛋白質為280nm,在波長260nm時,1OD值相當于雙鏈DNA濃度為50μg/ml,單鏈 寡核苷酸的含量為30μg/ml,可以據(jù)此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的OD值的比值 （OD260/OD280）,估計核酸的純度.純凈DNA的比值為1.8, RNA為2.0.若比值高于1.8說明DNA樣品中的RNA尚未除 盡,若樣品中含有酚和蛋白質將導致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干擾. 紫外分光光度法只能用于測定濃度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,對濃度更小的樣品,可采用熒光分光光度法. 試劑與儀器： 提取的質粒DNA,紫外分光光度儀. 操作步驟： 1) 分光光度計先用水在260nm和280nm兩個波長下校零. 2) 取質粒DNA樣品2μl,用水稀釋100倍,轉入分光光度計的石英比色杯中. 3) 在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值.如果樣品濃度單位為μg/μl,則樣品DNA濃度為OD 值的10倍,即如 OD260=0.1,則樣品濃度即為1μg/μl. 4) 若OD260/OD280大于1.8,說明仍有RNA,可以考慮用RNA酶處理樣品,若小于1姬俯灌謊弒荷鬼捅邯拉.8,說 明樣品中含有蛋白質或酚,應再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀純化DNA.

回答(2). 蛋白質組成氨基酸中的苯丙酮酸、酪氨酸和色氨酸含有苯環(huán)共軛雙鍵，具有光吸收能力。苯丙氨酸的最大吸收護浮篙簧蕻毫戈桐恭昆波長在259，酪氨酸最大吸收波長在278，色氨酸最大吸收波長在279。一般采用紫外分光光度計在在280nm處測量。

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